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Bradford法是最简单和快速的比色蛋白定量方法。这一方法基于考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后，产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在465～595nm处有最大的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可通过检测595nm的光吸收值的大小来计算蛋白的含量。本制品将传统的Bradford方法进行了改良，最大限度的加大蛋白定量的线性范围，变异性小于普通考马斯亮蓝染色法，灵敏度范围为100-1,500μg/mL。使用本制品反应迅速，颜色产物1小时内保持稳定。本试剂盒适用于多种缓冲液系统，不受金属离子、还原剂和螯合剂的干扰。

• BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致(可用1×PBS或0.9%生理盐水进行稀释)。
  
• 本试剂盒不适合含有去污剂的蛋白定量，具体干扰物质(具体见附表1)，可采用BCA蛋白定量试剂盒(WE0276)或其他蛋白定量产品。
  
• 所测蛋白分子量必须大于3kD。

• 稀释BSA标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。
  

  管号	稀释液用量(μl)	BSA标准品用量(μl)	BSA标准品最终浓度(μg/ml)
  A	0	100	2000
  B	50	150	1500
  C	200	200	1000
  D	200	200(从C管中取)	500
  E	200	200(从D管中取)	250
  F	200	200(从E管中取)	125
  G	200	0	0(空白)

• 试管检测(检测范围：100～1500μg/mL)
  
  • 按上表稀释标准品，将30μL稀释好的BSA标准品分别加到作好标记的试管中。
    
  • 取干净的试管，分别加入30μL待测蛋白样品(原液或稀释液)，并作好标记，推荐每个测定做2～3个平行反应。
    
  • 向步骤a和步骤b的试管中各加入1.5mL Bradford Protein Assay Reagent，充分混匀，室温放置10分钟。
    
  • 用分光光度计测定595nm处的吸光值。
    
  • 绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
    注意：数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得，实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。
    
  • 如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。
• 微孔检测(检测范围：100～1500μg/mL)
  
  • 将按表1稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各5μL分别加到作好标记的96孔板微孔中。
    
  • 每孔加入250μL Bradford Protein Assay Reagent，充分混匀，盖上96孔板盖，室温放置10分钟。
    
  • 用酶标仪测定595nm处的吸光值。
    
  • 绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
    注意：数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得，实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。
    
  • 如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。